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《食品中胆固醇的测定》标准介绍


    来源:中轻网     更新时间:2005-10-31       评论: 0

    1 主题内容与适用范围

  本标准规定了用分光光度计测定各类动物性食品中胆固醇的方法。

  本标准适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。
            
   2 原理

   当固醇类化合物与酸作用时,可脱水并发生聚合反应,产生颜色物质。因此可先对食品样品进行提取和皂化,用硫酸铁铵试剂作为显色剂,测定食品中胆固醇的含量。

  3 试剂

  全部试剂除注明外均为分析纯,实验用水为蒸馏水。

   3.1 石油醚。

   3.2 无水乙醇。

    3.3 浓硫酸。

   3.4 冰乙酸:优级纯。

   3.5 磷酸。

    3.6 胆固醇标准物质。

   3.7 胆固醇标准液。

   3.7.1 胆固醇标准储备液(1mg/mL):精确称取胆固醇100mg,溶于冰乙酸中,并定容至100mL。此液至少在2个月内保持稳定。

   3.7.2 胆固醇标准常备液(100μg/mL):吸取胆固醇标准储备液10mL,用冰乙酸定容至100mL。此液用时临时配制。

   3.8 铁矾显色剂。

   3.8.1 铁矾储备液:溶解4.463g硫酸铁铵[FeNH4(SO4)2·H2O]于100mL85%磷酸中,贮于干燥器内,此液在室温中稳定。

   3.8.2 铁矾显色液:吸取铁矾储备液10mL,用浓硫酸定容至100mL。贮于干燥器内,以防吸水。

   3.9 50%氢氧化钾溶液:称取50g氢氧化钾,用蒸馏水溶解,并稀释至100mL。

   3.10 5%氯化钠溶液:称取5g氯化钠,用蒸馏水溶解,并稀释至100mL。

   3.11 钢瓶氮气:纯度99.99%。

   4 仪器和设备

   4.1 实验室常用设备。

   4.2 721型分光光度计。

   4.3 电热恒温水浴。

   4.4 电动振荡器。

   4.5 具玻塞试管:体积10mL、25mL。

    5 操作步骤

   5.1 胆固醇标准线

  吸取胆固醇标准常备液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL分别置于10mL试管内,在各管内加入冰乙酸使总体积皆达4mL。沿管壁加入2mL铁矾显色液,混匀,在15~90min内,在560~575nm波长下比色。以胆固醇标准浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标做标准曲线。

   5.2 样品测定

   5.2.1 食品脂肪的提取与测定

  根据食品种类分别用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪。并计算出每100g食品中的脂肪含量。

  5.2.2 食品胆固醇的测定

  将提取的油脂3~4滴(约含胆固醇300~500μg),置于25mL试管内,准确记录其重量。加入4mL无水乙醇,0.5mL 50%氢氧化钾溶液,在65℃恒温水浴中皂化1h。皂化时每隔20~30min振摇一次使皂化完全。皂化完毕,取出试管,冷却。加入3mL  5%氯化钠溶液,10mL石油醚,盖紧玻塞,在电动振荡器上振摇2min,静置分层(一般约需1h以上)。

  取上层石油醚液2mL,置于10mL具玻塞试管内,在65℃水浴中用氮气吹干,加入4mL冰乙酸,2mL铁矾显色液,混匀,放置15min后在560~575nm波长下比色,测得吸光度,在标准曲线上查出相应的胆固醇含量。

   6 结果计算

  7 平均允许误差

  同一实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过平均值的10%。

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